G Protein Kenetli Östrojen Reseptör 1 (Gper1)'In Gastrointestinal Adenokarsinom Hücrelerindeki Proliferatif ve Apoptotik Etkilerinin Araştırılması

Abstract

Çalışmamızda kadın hastalardan elde edilen AGS ve HT-29, mide ve kolorektal adenokarsinom hücre hatlarında GPER1 reseptörünün proliferatif ve apoptotik etkilerinin belirlenmesi ve hücreiçi sinyal yolaklarını araştırmak için GPER1 agonisti G-1 maddesi tek başına ve GPER1 protein kinaz ve kalsiyum kanal inhibitörleri varlığında hücre hatlarına uygulandı. Etken maddemiz G-1?in hangi hücre içi yolaklarla ilişkili olabileceğini bulmak için 10-5 M konsantrasyonda G-1 ile kombine olarak hücre içi sinyal yolaklarını inhibe eden inhibitörler; GPER1 inhibitörü G-15, protein kinaz A inhibitörü H-89, protein kinaz C (PKC) inhibitörü GF109203, fosfotidilinozitol 3-kinaz (PI3K) inhibitörü LY-294002, Rho-kinaz (ROCK) inhibitörü Y-27632, kalsiyum ATPaz inhibitörü tapsigargin ve inositol 1,4,5 trifosfat (IP3)inhibitörü 2-APM kullanıldı. Kombine uygulamaların hücre canlılığı üzerine etkisi 48. ve 72. saatlerde MTT yöntemiile değerlendirildi. MTT ve Xcelligance sonuçlarına göre, GPER1 agonisti G-1, AGS ve HT-29 hücreleri üzerinde konsantrasyona ve zamana bağlı olarak sitotoksik ve antiproliferatif etki göstermiştir. Hücre proliferasyon deney sonuçlarına göre AGS mide kanser hücre hattında GPER1 agonisti G-1'in oluşturduğu sitotoksik ve antiproliferatif etki inositol 1,4,5 trifosfat (IP3) bağımlı görünmektedir. HT-29 kolon kanser hücre hattında, GPER1 agonisti G-1'in oluşturduğu sitotoksik ve antiproliferatif etki fosfotidilinozitol 3-kinaz (PI3K) ve inositol 1,4,5 trifosfat (IP3) bağımlı görünmektedir. Yapılan denemelerde G-1 maddesinin en yüksek konsantrasyonu ile 72 saat inkübasyon sonunda AGS kanser hücre hattında % 49.1 oranında nekroz, % 9.9 erken apoptoz, % 4.1 geç apoptoz;HT-29 kanser hücre hattında % 32.6 nekroz, % 2.2 erken apoptoz, % 2.2 geç apoptoz gözlenmiştir. GPER1 agonisti G-1 in p53, Bcl-2 ve Bax ekspresyon üzerine etkisi sonuçlarına göre; G-1 in oluşturduğu apoptotik etkiye, p53 sinyal iletim yolağının aracılık ettiği görülmektedir (Bax ekspresyon artışı ve Bcl-2 ekspresyon azalması). Real-Time PCR ve görüntüleme sonuçlarına göre HT-29 ve AGS hücrelerinde siRNA kullanarak GPER1 ekspresyonubaşarılı bir şekilde baskılanmıştır. MTT hücre proliferasyon deney sonuçlarında, GPER1 agonisti G-1, siRNA uygulanmamış ve uygulanmış hücreler üzerinde benzer etki göstermiştir. GPER1 agonisti G-1'in oluşturduğu sitotoksik ve antiproliferatif etki GPER1 reseptör bağımlı görünmemektedir. Sonuç olarak; GPER1 agonisti G-1, AGS ve HT-29 kanser hücrelerinde yüksek dozda belirgin olarak sitotoksik ve antiproliferatif etki oluşturmuştur. Bu çalışma GPER1 agonisti G-1? i mide ve kolorektal kanser hastaları için yeni bir hedef haline getirebilir; mide ve kolorektal kanser hastaları üzerinde ikinci basamak çalışmaların yapılmasına öncülük edebilir.