İnsan Primer Fibroblast Hücre Kültür Karakterizasyonu İçin Biyosensör Geliştirilmesi

Abstract

Hücre Kültürü, deneysel çalışmaların vazgeçilmez araçlarından biridir. Üç boyutlu organizmanın doğrudan kullanılamadığı pek çok deneysel çalışmanın uygulanabilir modeli olarak tercih edilmektedir. Herhangi bir doku parçası mekanik ya da enzimatik yollarla belirli hücreler elde etmek için kültüre edilebilir. Bu kültür işlerinin inceliklerinin yanında, primer kültürlerde ayrıca dikkat edilmesi gereken en önemli nokta, heterojen bir hücre topluluğunun içinden kendi ilgilendiğimiz hücre topluluğunun karakterizasyonunu yaparak deneylere bu hücreler üzerinden devam edebilmektir. Bu projede, ticari olarak elde edilebilen hücre hattının, ya da stabil ve kanıtlanmış bir deney hayvanı modelinin bulunmadığı durumlarda sıklıkla tercih edilen ve insandan doğrudan elde edilen primer kültürler üzerinde durulmuştur. Bu projenin amacı; çeşitli dokulardan elde edilen primer fibroblast hücre kültürlerinin karakterizasyonu için fibroblast biyobelirteci olarak bilinen ısı şok proteini 47 (HSP47) proteinini tanıyan bir biyosensör geliştirilmesinin sağlanmasıdır. Biyosensörler, analit ve biyoaktif molekül ilişkisine dayalı olarak geliştirilen ucuz, güvenilir ve hızlı ölçüm sistemleridir. HSP47 biyosensörünün geliştirilmesi için, spesifik moleküller olan antikorların, dönüştürücü yüzeyinin modifikasyonundan sonra yüzeye immobilize edilmesi ve bundan sonra da HSP-47 molekülü ile antikor arasındaki afiniteye bağlı olarak yüzeyin elektrokimyasal olarak incelenmesi gerçekleştirilmiştir. Bunun için altın nanopartikül elektrotlar kullanılmış ve grafen oksit ile modifiye edilmişlerdir. Biyosensörün performansı hem standartlarda hem de hücrelerde test edilmiştir. Biyosensörün düşük tespit limiti (LOD) ve lineer tespit limiti (LOQ) sırasıyla 0,06 ng/mL ve 0,183 ng/mL olarak hesaplandı. Doğrusal ölçüm aralığı 10-160 pg/mL arasında elde edildi. Böylece literatürde ilk kez HSP47?nin primer fibroblast kültürlerinde belirlenmesi için impedimetrik bir biyosensör geliştirilmiş oldu.