Raw 264.7 Makrofaj Hücre Kültüründe Lipopolisakkarid ile Oluşturulan in Vitro Sepsis Modelinde Vareniklinin İnflamasyon ve Migrasyon Süreçleri Üzerine Alfa7 Nikotinik Asetilkolin Reseptörü Aracılı Etkileri

Abstract

Vücutta oluşan sistemik bir inflamatuvar yanıt olan sepsiste gelişen inflamasyonun kontrolünde kolinerjik antiinflamatuvar yolak önemli bir işlev görmektedir. Çalışmamızda, fare RAW 264.7 makrofaj hücrelerinde lipopolisakkarit (LPS) ile oluşturulan in vitro inflamasyon modelinde bir alfa-7 nikotinik asetilkolin reseptör (?7nAChR) agonisti olan vareniklinin inflamatuvar sitokinler, hücre proliferasyonu ve migrasyonu üzerine etkileri araştırılmıştır. Makrofaj hücrelerine artan konsantrasyonlarda (0,1-0,5-0,8-1 µM) LPS uygulaması sonucunda 24 saatte değişen sitokin konsantrasyonuna göre etkin LPS dozu belirlenmiştir. Ardından, etkin LPS dozu kullanılarak artan konsantrasyonlarda vareniklinin (1-3-10-30 µM) 24 saat sonunda sitokin düzeylerini üzerine etkisi belirlenmiş ve deksametazonun etkisi ile karşılaştırılmıştır. Vareniklin varlığında nikotinik asetilkolin reseptörlerinin (nAChR) işlevi selektif olmayan nAChR antagonisti mekamilamin; ?7nAChR'lerin işlevi ise selektif ?7nAChR antagonisti metililkakonitin ile araştırılmıştır. Vareniklinin LPS ile uyarılan hücre proliferasyonu ve migrasyonuna olan etkisi gerçek zamanlı olarak incelenmiştir. LPS uygulamasından 24 saat sonra hücreler toplanmış ve ELISA ile IL-1ß, IL-6 ve TNF? seviyeleri belirlenmiştir. İlaç uygulamalarından 24 saat sonra gerçek zamanlı hücre proliferasyonu ve migrasyon testleri yapılmıştır. Vareniklin, konsantrasyona bağlı olarak (1-3-10-30 µM), deksametazon uygulamasına benzer şekilde, LPS uygulamasına bağlı 24 saat sonra artan IL-1ß, IL-6 ve TNF? düzeyleri azaltmıştır. Bulgularımız, vareniklinin LPS ile uyarılan IL-1ß, IL-6 ve TNF? düzeylerini çoğunlukla ?7nAChR aracılığı ile azaltığını düşündürmektedir. Ek olarak, vareniklin LPS kaynaklı hücre proliferasyonunu ve migrasyonunu inhibe etmektedir. Vareniklinin, antiproliferatif etkinliğinden farklı olarak, migrasyonu ?7nAChR aktivasyonu ile baskıladığı gözlenmektedir. Sonuç olarak bulgularımız, ?7nAChR agonisti vareniklinin kolinerjik antiinflamatuvar yolak üzerine etki ederek makrofaj proliferasyonu ve migrasyonunun yanı sıra sitokin salıverilişini de baskılayarak antiinflamatuvar etkinlik gösterdiğini düşündürmektedir.